Poliacrilamida eletroforese em gel (PAGE) é uma técnica amplamente utilizada em bioquímica, biologia molecular e química analítica para separar e analisar proteínas, ácidos nucléicos e outras macromoléculas com base em seu tamanho e carga. A poliacrilamida é a matriz de gel utilizada nesta técnica.

Aqui está uma visão geral do processo:

1. Preparação do Gel: Os géis de poliacrilamida são formados pela polimerização de monômeros de acrilamida e bisacrilamida. A acrilamida fornece a estrutura do gel, enquanto a bisacrilamida atua como agente de reticulação. A porcentagem de bisacrilamida determina o tamanho dos poros do gel, afetando a resolução da separação para diferentes faixas de peso molecular. O gel é normalmente moldado num formato vertical ou horizontal.

2. Carregamento da amostra: As amostras contendo as moléculas a serem separadas são misturadas com um agente desnaturante (por exemplo, dodecil sulfato de sódio - SDS) e um agente redutor (por exemplo, β-mercaptoetanol) para desnaturar e linearizar as moléculas. A mistura é normalmente aquecida para desnaturar ainda mais as proteínas. Uma carga elétrica é adicionada às amostras para facilitar o movimento durante a eletroforese.

3. Eletroforese: O gel é imerso em uma solução tampão e colocado entre dois eletrodos. As moléculas carregadas negativamente migram em direção ao eletrodo carregado positivamente (ânodo) através da matriz de gel sob a influência de um campo elétrico. A taxa de migração é determinada pelo tamanho e carga das moléculas. Moléculas menores se movem mais rápido e migram para mais longe, enquanto moléculas maiores são mais lentas e permanecem mais próximas da posição de carregamento.

4. Visualização: Após a eletroforese, as moléculas separadas são visualizadas utilizando métodos de coloração específicos para o tipo de moléculas analisadas. Por exemplo, as proteínas podem ser coradas com Coomassie Brilliant Blue ou coloração com prata, enquanto os ácidos nucleicos podem ser visualizados com brometo de etídio ou corantes fluorescentes. O gel corado é então fotografado ou escaneado para análise.

5. Interpretação: O padrão resultante ou perfil de bandas no gel é analisado para inferir informações sobre o tamanho, quantidade e pureza das moléculas separadas. Marcadores de peso molecular de tamanhos conhecidos são geralmente incluídos no gel para auxiliar na determinação do tamanho aproximado das moléculas desconhecidas.

Poliacrilamida a eletroforese em gel é uma técnica versátil que pode ser usada em diversas aplicações, incluindo análise de proteínas, sequenciamento de DNA, clonagem molecular e estudo de cinética enzimática. Permite aos pesquisadores separar e visualizar macromoléculas com base em suas características únicas, possibilitando uma melhor compreensão de sua estrutura e função.