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O que é eletroforese em gel de poliacrilamida

Jul 29, 2024

Poliacrilamida eletroforese em gel (PAGE) é uma técnica comumente usada em bioquímica, biologia molecular e biotecnologia para separar e analisar biomoléculas, principalmente proteínas e ácidos nucléicos, com base em seu tamanho e carga. A técnica envolve a utilização de uma matriz de gel composta por poliacrilamida, substância que forma uma rede porosa quando polimerizada.

 

Durante a preparação do gel, os monômeros de acrilamida são misturados com um agente de reticulação, geralmente bis-acrilamida, e um iniciador de polimerização. Esta mistura é então vertida em uma bandeja de moldagem de gel e deixada polimerizar, formando um gel sólido. A concentração de acrilamida determina a faixa de tamanho das moléculas que podem ser resolvidas, com concentrações mais baixas adequadas para moléculas maiores e concentrações mais altas para moléculas menores.

 

Uma vez solidificado o gel, ele é colocado verticalmente em um aparelho de eletroforese composto por dois eletrodos conectados a uma fonte de alimentação. O gel é submerso em uma solução tampão que conduz eletricidade. Amostras contendo as biomoléculas de interesse, normalmente misturadas com um tampão de carga, são carregadas em poços feitos no gel.

 

Quando uma corrente elétrica é aplicada, as biomoléculas migram através da matriz do gel. A migração ocorre devido à carga elétrica transportada pelas biomoléculas e sua interação com a matriz do gel. Moléculas menores movem-se mais rapidamente através dos poros do gel, enquanto moléculas maiores são impedidas e migram mais lentamente.

 

Após o processo de eletroforese, o gel pode ser corado com corantes específicos ou tratado com anticorpos para visualizar e detectar as biomoléculas separadas. A imagem de gel ou padrão de bandas resultante pode fornecer informações sobre o tamanho, forma e abundância relativa das moléculas na amostra. Os pesquisadores costumam usar o PAGE para identificar proteínas, analisar complexos proteicos, avaliar a pureza das proteínas e determinar o tamanho dos fragmentos de ácidos nucleicos.

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